PKC、PKA和TPK在血小板激活中的作用

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目的:研究蛋白激酶C(PKC),蛋白激酶A(PKA),酪氨酸蛋白激酶(TPK)在血小板聚集激活中的作用。方法:本实验是在阿斯匹林阻断花生四烯酸代谢,Apyrase去除ADP情况下,利用32P-NaH2PO4标记猪血小板,然后以PMA、凝血酶、PGF1、腺苷等处理。以血小板聚集仪测定血小板聚集;SDS-PAGE分离血小板蛋白;并进行放射自显影;碱处理电泳凝胶检测酪氨酸蛋白激酶(TPK)底物;TLC进行磷酸氨基酸分离。结果:(1)随着PMA激活PKC,血小板发生聚集;(2)35μmol/LPGF1或1mmol/Ldb-cAMP不能抑制50nmol/LPMA诱导的血小板聚集,腺苷却能抑制PMA诱导的血小板聚集(EC50=0.1mmol/L).(3)db-cAMP、腺苷都不能抑制100nmol/LPMA诱导的40kD蛋白磷酸化,PKA激活不能抑制PMA激活的PKC。(4)在PMA、凝血酶激活的血小板中,PKC、TPK都发生激活,40kD底物既是PKC的底物又是TPK的底物。结论:PKC和TPK在血小板聚集中起着重要的调节作用。
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