【摘 要】
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l目的 筛选能特异性裂解耐药肺炎克雷伯菌的噬菌体并对其生物学及全基因组学特性进行分析.方法 以耐药肺炎克雷伯菌为宿主菌分离噬菌体,用双层琼脂平板法纯化噬菌体并测定其生物学特性,透射电镜观察噬菌体形态.提取噬菌体DNA,使用illumina平台测序噬菌体基因组并分析其特性.结果 从上海交通大学医学院附属瑞金医院污水中筛选纯化得到1株肺炎克雷伯菌属噬菌体,命名为vB_KpnP_1209.透射电镜观察该噬菌体由正二十面体头部和尾部组成,属于有尾噬菌体目、短尾噬菌体科.其宿主菌裂解率为16％.vB_KpnP_12
【机 构】
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上海交通大学医学院基础医学院,上海200025;上海交通大学医学院免疫学与微生物学系;上海交通大学医学院基础医学实验教学中心
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l目的 筛选能特异性裂解耐药肺炎克雷伯菌的噬菌体并对其生物学及全基因组学特性进行分析.方法 以耐药肺炎克雷伯菌为宿主菌分离噬菌体,用双层琼脂平板法纯化噬菌体并测定其生物学特性,透射电镜观察噬菌体形态.提取噬菌体DNA,使用illumina平台测序噬菌体基因组并分析其特性.结果 从上海交通大学医学院附属瑞金医院污水中筛选纯化得到1株肺炎克雷伯菌属噬菌体,命名为vB_KpnP_1209.透射电镜观察该噬菌体由正二十面体头部和尾部组成,属于有尾噬菌体目、短尾噬菌体科.其宿主菌裂解率为16％.vB_KpnP_1209在pH 3～10及温度4～50℃的环境中具有较高活性.一步生长曲线表明,噬菌体在裂解宿主菌时的潜伏期为10 min,爆发期持续10 min左右,20 min后进入平稳期,裂解量为170 PFU/cell(plaque-forming units per cell).吸附曲线显示,20 min时其吸附率达到最大值99％.vB_KpnP_1209基因组全长40222 bp,编码45个开放阅读框(open reading frame,ORF),CG含量50.99％.全部ORF中有11个ORFs编码已知功能蛋白.vB_KpnP_1209与Klebsiella phage K11 (EU734173.1)全基因组一致性为95.18％.vB_KpnP_1209属于Studiervirinae亚科Przondovirus属,其基因组中未发现tRNA、耐药基因及毒力因子基因.结论 筛选的vB_KpnP_1209基因组容量小、结构规整,有潜力成为研究耐药肺炎克雷伯菌噬菌体的模式噬菌体.其生物学特性稳定,安全性高,有望用于治疗耐药肺炎克雷伯菌所致的难治性感染.
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