【摘 要】
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目的 探讨激活胰岛素样生长因子(IGF)-I受体后,大鼠结肠平滑肌细胞(SMC)合成干细胞因子(SCF)的变化及其信号途径.方法 酶解法分离培养SD大鼠结肠SMC,免疫组化鉴定.2.5×10~5/ml SMC接种培养,①加入100μg/L IGF-I分别培养0、8、16、24、48 h;②分别加入0、5、10、50、100、150μg/L IGF-I培养16 h.同时设空白对照组和1GF-I组.免
【机 构】
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目的 探讨激活胰岛素样生长因子(IGF)-I受体后,大鼠结肠平滑肌细胞(SMC)合成干细胞因子(SCF)的变化及其信号途径.方法 酶解法分离培养SD大鼠结肠SMC,免疫组化鉴定.2.5×10~5/ml SMC接种培养,①加入100μg/L IGF-I分别培养0、8、16、24、48 h;②分别加入0、5、10、50、100、150μg/L IGF-I培养16 h.同时设空白对照组和1GF-I组.免疫荧光、Western印迹、逆转录(RT)-PCR法检测SMC经不同浓度和不同时间IGF-I刺激后SCF的表达.并用50μmol/L LY-294002、PD-98059分别阻断磷脂酰激醇3激酶(P13K)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径,观察SCF的变化是否与P13K、MAPK信号途径有关.结果 在无血清培养条件下,SCF在大鼠结肠SMC中少量表达,低剂量IGF-I(5和10μg/L)对SCF表达无影响,中、高剂量IGF-I(50、100、150μg/L)诱导其表达增加,100 μg/L可能为体外最大有效浓度,其促SCF合成的最高峰在第16小时.分别用LY-294002、PD-98059预处理SMC、再用IGF-I诱导,LY-294002对SCF的表达无影响、PD-98059能部分阻断SCF的表达.结论 IGF-I可能通过MAPK信号通道诱导SCF在结肠SMC中的表达,提示其可能是IGF-I调控结肠SMC产生SCF的机制。
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