【摘 要】
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目的 借助1-甲基-4-苯基-吡啶离子（MPP+）诱导的SH-SY5Y帕金森病（Parkinson’s disease, PD）细胞模型，研究内质网跨膜蛋白166（TMEM166）对PD细胞模型氧化应激的影响及其机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为A、B、C、D、E、F组，A～C组分别用0、1.0和1.5 mmol/L的MPP+各处理24、48、72 h; D、E组分别转染Myc-TMEM166质
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81600470）； 山东省自然科学基金（ZR2022MC053）；
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目的 借助1-甲基-4-苯基-吡啶离子（MPP+）诱导的SH-SY5Y帕金森病（Parkinson’s disease, PD）细胞模型，研究内质网跨膜蛋白166（TMEM166）对PD细胞模型氧化应激的影响及其机制。方法 将SH-SY5Y细胞分为A、B、C、D、E、F组，A～C组分别用0、1.0和1.5 mmol/L的MPP+各处理24、48、72 h; D、E组分别转染Myc-TMEM166质粒和Myc空质粒，再用1.0 mmol/L MPP+处理24 h; F组转染Myc-TMEM166质粒后，再用1.0 mmol/L MPP+和1.0 mmol/L 3-甲基腺嘌呤（3-MA）共处理24 h。采用CCK-8法检测细胞相对活力，采用活性氧（ROS）检测试剂盒检测ROS生成情况，采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测细胞TMEM166 mRNA的表达水平，采用蛋白质印迹（Western blot）实验检测细胞中TMEM166蛋白及自噬相关蛋白p62和LC3Ⅱ/Ⅰ的表达水平。结果 B、C组SH-SY5Y细胞在不同时间的相对细胞活力比较具有显著差异（F=58.56、35.81,P＜0.05）;在同一时间点，各组细胞的细胞相对活力比较也有显著差异（F=21.56～45.16,P＜0.05）。MPP+处理24 h后，A、B组SH-SY5Y细胞ROS生成水平比较有显著差异（t=25.94,P＜0.05）。随着MPP+处理浓度增高，A～C组细胞中TMEM166蛋白表达水平逐渐下降（F=290.80,P＜0.05）,而TMEM166的mRNA水平逐渐升高（F=315.20,P＜0.05）。D组和E组相比，MPP+处理导致的SH-SY5Y细胞ROS生成水平、细胞相对活力、p62蛋白水平和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白水平有显著差异（t=2.91～6.69,P＜0.05）。与D组相比，F组SH-SY5Y细胞中ROS生成明显减少（t=3.91,P＜0.05）。结论 TMEM166可能通过增强自噬加重MPP+诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激。
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