【摘 要】
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从甘肃景泰羊源脑多头蚴原头节提取总RNA,以Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,利用Lambda ZAP II XR文库构建试剂盒构建了脑多头蚴cDNA表达文库.从构建的原始文库随机挑选单个噬菌
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,中国农业科学院兰州兽医研究所,兰州市七里河区动物疫病预防控制中心,University of Agricultural Sciences and Veterinary Medi
【基金项目】
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国家科技支撑计划;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项;中国-罗马尼亚政府间科技合作项目
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从甘肃景泰羊源脑多头蚴原头节提取总RNA,以Oligo(dT)纤维素柱纯化mRNA,利用Lambda ZAP II XR文库构建试剂盒构建了脑多头蚴cDNA表达文库.从构建的原始文库随机挑选单个噬菌斑进行PCR,确定文库重组率和插入外源基因片段大小,鉴定文库质量.结果表明脑多头蚴cDNA表达文库的原始库容量为1.0×106 pfu,扩增后文库滴度为1.6×109 pfu/mL.随机挑选的165个噬菌斑克隆中,0.25 kb以上的克隆155个,重组率为93.9%,对其中0.5 kb以上的115个克隆测序共获得104个表达序列标签(EST),分析后得到96个单一EST序列(Unique EST),其中20个EST与绦虫基因有同源性,38个EST与吸虫基因有同源性,4个EST与线虫基因有同源性,17个EST与其他物种有同源性,其余17个EST没有同源基因.这些EST编码的氨基酸序列有多头带绦虫六钩蚴Tm16抗原、猪带绦虫副肌球蛋白、猪带绦虫免疫原蛋白Ts76等绦虫抗原的同源蛋白以及烯醇化酶等一些酶类、热休克蛋白、肌动蛋白、核糖体蛋白等同源蛋白.
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