【摘 要】
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目的 构建过表达大鼠Ctnnbl (catenin beta 1)慢病毒载体,建立过表达Ctnnb1的大鼠间充质干细胞(MSC)稳转株,为后续研究过表达Ctnnb1的MSC产生的外泌体对老年慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压(COPD-PH)的作用和机制奠定基础.方法 PCR扩增Ctnnb1基因全序列,将序列插入PGMLV-18844:PGMLV-CMV-MCS-3×Flag-PGK-Puro载体,构建PGMLV-CMV-Rat_Ctnnb1-3×Flag-PGK-Puro慢病毒表达质粒,质粒瞬转293细胞后
【机 构】
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复旦大学附属华东医院上海市老年医学研究所,上海200040;解放军总医院第二医学中心老年医学科,北京100853
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目的 构建过表达大鼠Ctnnbl (catenin beta 1)慢病毒载体,建立过表达Ctnnb1的大鼠间充质干细胞(MSC)稳转株,为后续研究过表达Ctnnb1的MSC产生的外泌体对老年慢性阻塞性肺疾病相关肺动脉高压(COPD-PH)的作用和机制奠定基础.方法 PCR扩增Ctnnb1基因全序列,将序列插入PGMLV-18844:PGMLV-CMV-MCS-3×Flag-PGK-Puro载体,构建PGMLV-CMV-Rat_Ctnnb1-3×Flag-PGK-Puro慢病毒表达质粒,质粒瞬转293细胞后,使用Western Blot验证其过表达效率.再将构建的慢病毒载体和包装质粒共转染293细胞,包装病毒.包装的过表达慢病毒和阴性对照病毒感染大鼠MSC,再次使用Western Blot测定其过表达效果.结果 经测序分析,本研究成功构建了PGMLV-CMV-Rat Ctnnb1-3×Flag-PGK-Puro慢病毒载体.Western Blot结果提示,该慢病毒载体成功转染293细胞,构建的载体能高效过表达Ctnnb1;过表达Ctnnb1的慢病毒感染大鼠MSC后,得到过表达Ctnnb1基因的大鼠MSC稳转株.结论 本研究成功构建过表达Ctnnb1慢病毒及其稳转大鼠MSC株.
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