论文部分内容阅读
目的检测腺病毒介导人TGF-β1（human TGF-β1,h TGF-β1）基因转染至腘绳肌腱重建兔前交叉韧带（anterior cruciate ligament,ACL）术后不同时间点的表达。方法以DMEM培养基稀释重组腺病毒载体Adh TGF-β1与腺病毒空载体Ad-绿色荧光蛋白（green l uorescent protein,GFP）,使病毒滴度为5×108 PFU/m L。取1520月龄雄性新西兰大白兔48只,随机分为A、B、C 3组（n=16）,以兔双侧后肢膝关节为研究对象,取自体腘绳肌腱重建同侧ACL,重建前A、B组腘绳肌腱分别以Ad-h TGF-β1及Ad-GFP转染12 h,C组以DMEM培养作为对照组。转染后12 h应用荧光显微镜观察A、B组绿色荧光表达,ELISA法检测A组腘绳肌腱中TGF-β1蛋白表达量。术后2、4、6、8周取材,应用实时荧光定量PCR及Western blot法检测腘绳肌腱中h TGF-β1基因及蛋白表达。结果 A、B组腘绳肌腱经转染后均可见绿色荧光表达;ELISA法检测示,A组腘绳肌腱中TGF-β1蛋白表达量为（221.0±12.2）ng/m L。实时荧光定量PCR检测示,术后各时间点B、C组均未能检测到h TGF-β1 m RNA表达;术后2、4、6、8周,A组h TGF-β1 m RNA相对表达量逐渐下降,分别为1.004±0.072、0.785±0.038、0.469±0.053、0.172±0.021,各时间点间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测示,术后各时间点B、C组TGF-β1蛋白条带均为弱阳性,A组TGF-β1蛋白表达量均显著高于B、C组（P<0.05）,B、C组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。A组TGF-β1蛋白表达量随时间延长逐渐降低,各时间点间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论在腺病毒载体介导下,h TGF-β1基因能成功转染至腘绳肌腱并能在ACL重建术后有效表达。