人端粒酶hTERT抗体制备、鉴定及在肿瘤检测中的应用

来源 :中华病理学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Wayne_poplar
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目的 人端粒酶蛋白亚基 (hTERT)单克隆抗体制备及肿瘤检测应用。方法 利用多肽固相合成法 (Fmoc法 )合成hTERT抗原多肽 ,免疫BALB/c小鼠 ,以杂交瘤法制备单克隆抗体。应用ELISA ,Westernblot和免疫组织化学ABC法进行鉴定和肿瘤检测。结果 经合成得到hTERT抗原多肽hTERT9,免疫小鼠及细胞融合后得到抗hTERT9杂交瘤细胞 ;经 3次有限稀释法及ELISA筛选获得抗hTERT9单克隆抗体的杂交瘤细胞H4、G8和A11;H4、G8为IgM类 ,而A11为IgG1。半抗原竞争性抑制实验证明为hTERT9特异性单克隆抗体 ;相对亲和力实验发现G8株亲和力较H4株和A11株强。用H4及G8株单克隆抗体检测HeLa、2 93细胞 ,免疫印迹有特异相对分子质量≈ 12 30 0 0hTERT条带 ,免疫组织化学显示为细胞核着色 ,而正常细胞 2BS无阳性反应。免疫组织化学方法检测人癌组织、癌前病变、良性病变hTERT表达发现 :人肿瘤组织细胞阳性率为 80 31% (10 2 / 12 7) ,且大多为中度阳性和强阳性 ;癌前病变中 ,hTERT有 17 5 % (7/ 4 0 )弱阳性 ;良性肿瘤均为阴性。统计学分析表明 :hTERT在癌组织的表达显著高于癌前及良性病变 (P <0 0 1)。结论 通过固相合成hTERT抗原多肽和杂交瘤技术成功制备抗人端粒酶蛋白亚基hTERT单克隆抗体 ,并能运用于免疫印迹、免疫组织化学
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