【摘 要】
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为了实现在P.stipitis中进行无痕基因敲除,以Cre/LoxP系统为研究对象,首先通过同源重组构建尿嘧啶营养缺陷型树干毕赤酵母（ura3-）;同时通过定点突变pSH47-Hpt质粒的hpt基因和cr
【机 构】
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江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江南大学粮食发酵工艺与技术国家工程实验室,南京农业大学信息科技学院
【基金项目】
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江苏省自然科学基金（BK2011153,BK2012363）, 教育部“新世纪优秀人才支持计划”（NCET-11-0665）
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为了实现在P.stipitis中进行无痕基因敲除,以Cre/LoxP系统为研究对象,首先通过同源重组构建尿嘧啶营养缺陷型树干毕赤酵母（ura3-）;同时通过定点突变pSH47-Hpt质粒的hpt基因和cre基因,将CDS区CTG突变为TTG;最后以乙醛脱氢酶基因为靶基因,验证突变后的Cre/LoxP系统在P.stipitis进行无痕基因敲除的可行性。结果表明：本文在P.stipitis中成功使用潮霉素B抗性标记,经过修饰后的Cre/LoxP敲除系统能够在P.stipitis中无痕敲除目的基因,为后续研究P
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