登革病毒4型Ban18HK20株感染性克隆的构建、鉴定及稳定性分析

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ycboyyb
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目的

构建稳定的登革病毒4型Ban18HK20株感染性克隆,为深入研究登革病毒毒力位点及嵌合疫苗研发提供参考。

方法

根据登革病毒4型Ban18HK20株基因组序列设计特异引物,将病毒全长cDNA分6段进行亚克隆构建,再将其逐一拼接连入高拷贝质粒pSPTM中,获得稳定的病毒全长cDNA克隆,以其为模板体外转录RNA,并将RNA电转染Vero细胞,获得恢复病毒。通过蚀斑法、间接免疫荧光法、生长动力学试验、小鼠脑内致病力研究对恢复病毒的生物学特性进行鉴定,并利用RT-PCR扩增对传代病毒进行遗传稳定性研究。

结果

酶切及测序表明感染性克隆构建成功。获得的恢复病毒在蚀斑形态、病毒E蛋白表达、生长特征及小鼠脑内致病力等生物学特性方面同母本株一致,测序表明恢复病毒基因组序列与母本病毒相同,且遗传稳定。

结论

构建获得了稳定的Ban18HK20感染性克隆,建立了用于登革病毒研究的反向遗传学技术平台。

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