【摘 要】
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目的观察慢病毒介导骨形成蛋白2(BMP2)和血管内皮生长因子165(VEGF165)基因共转染对骨髓基质干细胞(MSCs)成骨分化的影响。方法构建携带BMP2、VEGF165和绿色荧光蛋白(GFP)基
【机 构】
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复旦大学运动医学中心华山医院运动医学与关节镜外科,上海交通大学附属第六人民医院骨科
【基金项目】
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上海市科委重大项目(054119520)~~
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目的观察慢病毒介导骨形成蛋白2(BMP2)和血管内皮生长因子165(VEGF165)基因共转染对骨髓基质干细胞(MSCs)成骨分化的影响。方法构建携带BMP2、VEGF165和绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组慢病毒表达载体,包装、生产携带BMP2、VEGF165和GFP基因的重组慢病毒(Lv-BMP、Lv-VEGF、Lv-GFP)。分离、培养W istar大鼠骨髓MSCs,分别以Lv-GFP(GFP组)、Lv-BMP(BMP组)、Lv-VEGF(VEGF组)转染MSCs,Lv-BMP和Lv-VEGF共转染MSCs(BMP+VEGF组),另设未转染MSCs对照组。RT-PCR法检测转染后7 d各组细胞BMP2、VEGF165 mRNA表达以及转染后1、2、4周各组细胞骨钙素(OCN)mRNA表达;ELISA法检测转染后1、4、8周各组细胞培养上清液BMP2、VEGF165蛋白表达以及转染后1、2、4周各组细胞培养上清液OCN蛋白表达;转染后第14天,各组细胞行碱性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性检测。结果 BMP+VEGF组BMP2、VEGF165 mRNA和蛋白高效共表达,BMP2 mRNA和蛋白表达与BMP组比较差异无统计学意义(P>0.05),VEGF165 mRNA和蛋白表达与VEGF组比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组、GFP组和VEGF组无BMP2 mRNA和蛋白表达;对照组、GFP组和BMP组无VEGF165 mRNA和蛋白表达;BMP+VEGF组OCN mRNA和蛋白表达显著高于其他各组(P<0.01)。BMP+VEGF组ALP染色阳性区域大于对照组、VEGF组和BMP组;BMP+VEGF组ALP活性显著高于其他各组(P<0.01)。结论慢病毒介导BMP2和VEGF165基因共转染可促进骨髓MSCs成骨分化。
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