粘质沙雷菌碳青霉烯类耐药机制研究

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目的:了解临床分离的粘质沙雷菌碳青霉烯类药物耐药机制及流行特点。方法收集温州医科大学附属第一医院2006-2012年临床分离的147株粘质沙雷菌,用Vitek2 Compact及配套革兰阴性细菌药敏卡检测其药敏情况;筛选出的11株碳青霉烯类耐药的粘质沙雷菌,用琼脂稀释法测定其对10种常见抗菌药物的MIC值;改良Hodge试验进行碳青霉烯酶表型检测;PCR检测碳青霉烯酶、AmpC酶、外排泵及外膜蛋白基因的携带情况;琼脂稀释法测定加入外排泵抑制剂CCCP前后碳青霉烯类药物MIC值的变化;SDS-PAGE分析菌株外膜蛋白有无缺失;对碳青霉烯耐药菌株进行接合转移试验,PCR扩增并测定接合子的MIC,PFGE分析菌株之间的同源性。结果11株粘质沙雷菌对青霉素类、头孢菌素类抗生素和厄他培南全部耐药,其中10株菌同时对亚胺培南和美罗培南耐药,但对氟喹诺酮类和氨基糖苷类药物有较好的敏感性;11株菌中10株携带blaKPC-2,1株携带blaIMP-1,8株菌同时携带blaEBC和blaMOX ,1株同时携带blaEBC和blaDHA ,1株菌同时携带blaEBC、blaMOX和blaDHA基因,其他基因未检出;加入CCCP后有7株菌对亚胺培南的MIC值降低4~64倍,有3株菌对厄他培南的MIC值降低8~256倍,而对美罗培南的MIC值没有变化;11株菌均未检出外膜蛋白缺失;有7株菌的blaKPC-2基因成功转移到受体菌,接合子与受体菌相比MIC值有不同程度提高;PFGE结果显示11株菌中有8株菌属于一个克隆型。结论产KPC-2碳青霉烯酶是本院粘质沙雷菌对碳青霉烯类耐药的主要原因,本研究表明KPC-2在温州地区存在克隆播散并且可以水平传播,故应引起高度重视。
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