【摘 要】
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胰岛素样因子1型受体（insulin-like growth factor 1 receptor, IGF-1R）基因在哺乳动物的生长发育和代谢中发挥着重要作用。本研究通过Gibson无缝链接（Gibson assembly）和重叠延伸PCR（genes plicing by overlap extension PCR, SOE PCR），利用p SMART LCKan载体将向导RNA（small
【基金项目】
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山东省现代农业产业技术体系创新团队项目（SDAIT-09-05）；
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胰岛素样因子1型受体（insulin-like growth factor 1 receptor, IGF-1R）基因在哺乳动物的生长发育和代谢中发挥着重要作用。本研究通过Gibson无缝链接（Gibson assembly）和重叠延伸PCR（genes plicing by overlap extension PCR, SOE PCR），利用p SMART LCKan载体将向导RNA（small guide RNA,sg RNA）插入lenti CRISPR v2质粒进行改造，构建IGF-1R基因敲除载体，通过菌液PCR、双酶切、基因测序对敲除载体进行评估；将该载体转染至小鼠（Mus musculus）胚胎成纤维细胞中，通过Western blot比较敲除组和对照组细胞IGF-1R蛋白表达量。结果表明，IGF-1R基因敲除载体构建成功；敲除组细胞IGF-1R蛋白表达量极显著降低（P＜0.01），表明成功敲除了小鼠胚胎成纤维细胞中IGF-1R基因。本研究改进了CRISPR/Cas9敲除系统表达载体的构建过程，为进一步在细胞层次研究IGF-1R基因的作用机制提供有力工具。
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