【摘 要】
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目的 构建人19号染色体长臂Nephrin基因和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)真核表达质粒,为进一步研究肾小球裂隙隔膜分子复合物构成与功能提供基础.方法 设计
【机 构】
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中国医科大学附属盛京医院,日本德岛大学研究生院生物科学研究所
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目的 构建人19号染色体长臂Nephrin基因和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)真核表达质粒,为进一步研究肾小球裂隙隔膜分子复合物构成与功能提供基础.方法 设计引物,扩增真核表达质粒pEGFP N3中的GFP基因片段,将其插入nephrin原核表达载体pcDNA3.1 nephrin V5-His,重组质粒经酶切鉴定后测序,并转染至COS-7细胞观察表达情况及生物学特性.结果 成功构建pcDNA3.1 nephrin-GFP重组质粒,并将Nephrin -GFP融合蛋白成功表达于COS-7细胞,进一步经交联实验证明Nephrin-GFP融合蛋白具有正确的细胞膜表达.结论 利用pEGFP N3和pcDNA3.1 nephrin V5-His可成功重组Nephrin-GFP表达质粒,为进一步研究肾小球裂隙隔膜分子复合物构成及其功能提供有利工具.
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