该文探讨了人诱导多能干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞过程中microRNA的动态表达变化情况.利用慢病毒技术构建可报告insulin基因表达的hiPSCs细胞株(INS-promoter-hiPSCs),通过“五步法”方案将其诱导为胰岛素分泌细胞;分别收集hiPSCs、内胚层细胞、原肠管细胞、胰腺祖细胞和胰岛素分泌细胞,并提取细胞总RNA;利用S-Poly(T) plus技术检测多种microRNA在胰岛β细胞分化过程中的动态表达水平.结果 显示,成功构建的INS-hiPSCs细胞株可报告胰岛素基因表达,在体外可将其诱导分化为胰岛素分泌细胞,流式分选获得约16％ EGFP表达阳性的纯胰岛素分泌细胞,分选好的细胞可用于下游实验;进一步验证分化过程中各组细胞的miRNAs表达,miR-495-3p、miR-199-5p、miR369-5p的PCR扩增循环阈值(Ct值)大于35,说明其表达水平极低;miR-152-3p、miR-133a-3p、miR-181 c-5p、miR-410-3p、miR-487a-3p、miR-338-3p、miR-30-5p、 miR-655-3p、miR-26a-3p、miR-182-5p、miR210-3p、miR-342-3p和miR-589-5p在分化过程中持续上调表达;miR-302a-3p、miR-222-3p和miR-802的表达水平在分化过程中显著下调.因此,诱导分化稳定表达的INS-promoter-hiPSCs细胞株可以成功实现对胰岛素阳性细胞的分选及富集,为后续筛选调控干细胞分化的miRNA提供了有力保障;并进一步验证分析了19种可能参与调控胰岛β细胞胚胎发育的micorRNA的动态表达变化,为多能干细胞定向分化为胰岛细胞的机制研究提供新线索,为体外获得功能性的胰岛β细胞奠定相关理论基础.