探讨糖原合酶激酶3β(GSK3β)在轻型/重症急性胰腺炎发病中的表达及作用
方法采用单独雨蛙素、雨蛙素联合脂多糖刺激分别构建轻型急性胰腺炎(MAP)和重症急性胰腺炎(SAP)的细胞模型,分别在2、4、8、12、24 h收集细胞培养基上清,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测淀粉酶、脂肪酶、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达变化,流式细胞术检测细胞凋亡率及坏死率,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测GSK3β及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3、-8、-9 mRNA表达变化。
结果雨蛙素组和雨蛙素+脂多糖组各时间点淀粉酶、脂肪酶、TNF-α、IL-6较对照组均增高,且在大多数时间点,雨蛙素+脂多糖组组比雨蛙素组水平更高,开始上调时间相同或更早(P< 0.05)。刺激24 h后,雨蛙素组凋亡率[(19.2±0.9)%]显著高于雨蛙素+脂多糖组[(10.2±0.5)%,P< 0.05]。雨蛙素组坏死率[(5.8±0.3)%]显著低于雨蛙素+脂多糖组[(13.6±0.7)%,P< 0.05]。SAP组的坏死/凋亡比值是MAP组的5倍。GSK3β的m RNA水平在雨蛙素组中是2 h短暂下调[相对表达量为(0.5±0.1)倍]后于8 h显著上升[相对表达量为(3.0±1.1)倍,P< 0.05],然后又逐步下降;而在雨蛙素+脂多糖组中则是是8 h才缓慢上调[相对表达量为(1.8±0.6)倍,P< 0.05],至24 h达到高峰[相对表达量为(3.6±0.3)倍,P< 0.05]。GSK3β和Caspase-3 mRNA水平均有升高,但差异无统计学意义(P> 0.05)。
结论采用单独雨蛙素、雨蛙素联合脂多糖刺激分别建立MAP和SAP细胞模型可行;GSK3β在MAP和SAP中可能通过促进腺泡细胞凋亡来起作用。