论文部分内容阅读
目的应用新型的气-液界面细胞染毒手段,探讨汽车尾气对人肺细胞毒性效应的影响程度,以及采用0.2μm滤器过滤尾气干预后的细胞毒性变化情况。方法用20 L Tedlar气袋收集汽车尾气,并通过粒径谱仪分析0.2μm滤器过滤前后的汽车尾气颗粒物数量、表面积和质量浓度。实验分为空白对照组、洁净空气组、汽车尾气过滤组和汽车尾气组。空白对照组未作任何处理;洁净空气组为21%O2和79%N2;汽车尾气过滤组为用0.2μm颗粒物过滤器过滤后的汽车尾气;汽车尾气组为用气袋直接收集的汽车尾气。除了空白对照组,其余3组利用气-液界面体外染毒技术,在染毒流量为25 mL/min,37℃水浴条件下,对生长在气-液界面插件多孔膜上的BEAS-2B细胞持续染毒60 min。利用CCK-8(cell counting Kit-8)检测法评价细胞的存活率。采用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(2’,7’-dichloro-dihydro-fluorescein diacetate,DCFH-DA)探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测汽车尾气对BEAS-2B细胞凋亡及坏死率的影响。结果汽车尾气组中0.510μm颗粒物数量浓度、表面积浓度和质量浓度分别为0.24×103个/cm3、0.29×103μm2/cm3和0.19μg/m3,10500 nm颗粒物数量浓度、表面积浓度和质量浓度分别为56×103个/cm3、34.53×108nm2/cm3和95 ng/m3。汽车尾气过滤组0.510μm颗粒物数量浓度、表面积浓度和质量浓度分别低于1个/cm3、1μm2/cm3和0.001μg/m3,10500 nm颗粒物数量浓度、表面积浓度和质量浓度与汽车尾气组相比分别降低了89.79%、93.57%和90.55%。洁净空气组的细胞存活率、胞内ROS、早期凋亡率和晚期凋亡坏死率分别为(90.15±4.25)%、(1.92±0.34)×105、(1.09±0.48)%、(8.93±3.31)%。与洁净空气组比较,两组汽车尾气组的细胞存活率、胞内ROS和晚期凋亡及坏死率差异均有统计学意义(P<0.05)。汽车尾气过滤组与汽车尾气组之间的比较发现,汽车尾气组细胞存活率[(58.09±4.06)%]低于汽车尾气过滤组[(66.85±3.49)%],差异有统计学意义(t=6.331,P<0.001),胞内ROS[汽车尾气过滤组∶汽车尾气组=(2.94±0.21)×105∶(3.32±0.49)×105,t=-1.252,P=0.279]、早期凋亡率[汽车尾气过滤组∶汽车尾气组=(1.09±0.30)%∶(0.99±0.10)%,t=0.708,P=0.497]和晚期凋亡坏死率[汽车尾气过滤组∶汽车尾气组=(21.75±10.37)%∶(15.32±2.74)%,t=1.347,P=0.242]差异均无统计学意义(P>0.05)。结论人肺细胞气-液界面暴露于汽车尾气可产生显著的毒性效应,0.2μm过滤器过滤尾气干预后,细胞毒性会明显降低。