论文部分内容阅读
目的
克隆人促凋亡基因(second mitochondria-derived activator of caspases，Smac)，研究Smac基因转染对Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的促凋亡作用。
方法从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长的cDNA；构建含Smac基因全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1/Smac，并转染人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞；用Western blot测定外源基因的表达；Hoechest 33 258和碘化丙锭双荧光染色，结合激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态；流式细胞仪分析细胞凋亡百分率；比色法测定caspase-3酶活性。
结果成功克隆人Smac基因全长cDNA，并构建真核表达载体pcDNA3.1/Smac；转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24 h，可显著诱导Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的凋亡，凋亡百分率达(43.7±2.5)%；转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24 h，可显著诱导Raji细胞中caspase-3酶活性上调，吸光度为0.936±0.041，与正常对照组(0.138±0.026)及空载体转染对照组(0.136±0.036)相比，P <0.05。
结论转染并表达外源性Smac基因，可显著诱导人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞凋亡。其机制可能与caspase-3酶活性上调有关。