【摘 要】
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目的:探讨肝癌细胞HepG2中多聚嘧啶区结合蛋白1(PTB P1)对铁死亡的影响及作用机制.方法:使用转染试剂增强PTBP1小干扰转染效率.沉默PTBP1后加入铁死亡诱导剂erastin,Western blot观察HepG2铁死亡通路中关键基因的表达变化,脂质过氧化物试剂盒(MDA)、铁离子检测试剂盒、活性氧检测试剂盒(ROS)检测铁死亡相关的指标,RNA免疫共沉淀(RIP)检测方法验证PTBP1的下游靶分子,Western blot、RT-qPCR验证沉默PTBP1前后多聚胞嘧啶结合蛋白1(PCBP1
【机 构】
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山东第一医科大学第一附属医院肝胆外科,山东 济南250000;滨州医学院烟台附属医院 胃肠外科,山东 滨州 264000
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目的:探讨肝癌细胞HepG2中多聚嘧啶区结合蛋白1(PTB P1)对铁死亡的影响及作用机制.方法:使用转染试剂增强PTBP1小干扰转染效率.沉默PTBP1后加入铁死亡诱导剂erastin,Western blot观察HepG2铁死亡通路中关键基因的表达变化,脂质过氧化物试剂盒(MDA)、铁离子检测试剂盒、活性氧检测试剂盒(ROS)检测铁死亡相关的指标,RNA免疫共沉淀(RIP)检测方法验证PTBP1的下游靶分子,Western blot、RT-qPCR验证沉默PTBP1前后多聚胞嘧啶结合蛋白1(PCBP1)的蛋白变化趋势.结果:沉默PTBP1后,erastin诱导下谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、铁蛋白重链1(FTH1)表达增加.“NC+erastin”组细胞内铁离子显著高于其他各组.“NC+erastin”组脂质过氧化物水平积累最为显著.在激光共聚焦显微镜下“si-PTBP1+erastin”组与“NC+erastin”组相比,红色荧光信号强度明显减弱.流式细胞术检测显示,“si-PTBP1 +erastin”组ROS水平较“NC+erastin”组下降.RIP检测发现,PCBP1富集倍数显著高于其他铁离子代谢基因;沉默PTBP1后,PCBP1表达显著下调.结论:PTBP1通过上调PCBP1,介导铁离子转运,增强铁死亡的敏感性.
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