【摘 要】
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目的:设计并构建人RSRC1基因小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并观察其沉默效果.方法:以人RSRC1基因的cDNA序列为靶标,设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,并将其克隆到siR
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目的:设计并构建人RSRC1基因小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并观察其沉默效果.方法:以人RSRC1基因的cDNA序列为靶标,设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,并将其克隆到siRNA表达载体pSliencer 2.1-U6 neo上,转化大肠杆菌DH5α菌株,抽提质粒,测序正确后将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过Western blot和荧光分析检测其抑制效果.结果:重组体测序成功后,Western blot分析证明构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性RSRC1表达;将siRNA重组质粒和带GFP标签的RSRC1共转染293T细胞,荧光显微镜下GFP的亮度明显减弱.结论:获得了2条人RSRC1 siRNA真核表达载体,均能有效地抑制RSRC1基因表达.
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