目的建立超高效液相色谱-串联质谱法测定9种大环内酯类抗生素药物的分析方法。方法采用响应面法优化净化方法。样品经1%甲酸-乙腈提取,提取液经50 mg C₁₈、80 mg N-丙基乙二胺（primary secondary amine,PSA）、100 mg MgSO₄净化,Waters ACQUITY UPLC HSS T₃色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.8μm）进行分离,采用电喷雾正离子多反应监测扫描（multiple reaction monitoring,MRM）模式下进行测定,外标法定量。结果其中8种抗生素线性范围1～50 ng/mL,替米考星为5～50 ng/mL,相关系数（r²）在0.9910-0.9993之间。替米考星检出限为2.5μg/kg,定量限为10μg/kg,其余8种化合物检出限均为0.5μg/kg,定量限均为2μg/kg。在低（替米考星10μg/kg,其他2μg/kg）、中（替米考星20μg/kg,其他10μg/kg）、高（替米考星40μg/kg,其他20μg/kg）3个添加水平下进行加标回收实验,9种抗生素平均回收率在81.30%～105.30%之间,相对标准偏差在0.77%～2.41%之间（n=6）。结论该方法操作简单、净化效果好、灵敏度、准确度和精密度均符合多残留检测技术要求,解决了大环内酯抗生素检测提取过程过于繁琐的问题,可为食品抗生素残留检测提供更方便、更快捷的检测方法支持。