论文部分内容阅读
背景:实验证实脐带血与骨髓在体外均可分离培养出间充质干细胞,且两种不同来源的间充质干细胞均具有自我更新及多向分化的能力。目的:比较脐血间充质干细胞与骨髓间充质干细胞的表型和生物学性状差异。设计、时间及地点:对比观察,于2007-10/2008-05在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成。材料:3份正常成人骨髓血,取自青岛大学医学院附属医院3例行自体干细胞移植治疗的糖尿病患者(40～50岁),3份胎儿脐带血取自青岛大学医学院附属医院妇产科。方法:在无菌条件下抽取糖尿病患者骨髓血0.5mL,肝素抗凝后与1.5mLPBS混匀,然后按1:1比例加入2mLpercoll淋巴细胞分层液中,2000r/min离心10min,吸取其云雾状白膜层,PBS冲洗稀释后1000r/min离心10min。离心后的沉淀细胞加入含体积分数为10%胎牛血清的LG-DMEM培养液,制成单细胞悬液后接种于培养瓶中。取胎儿脐带血,用PBS1:1稀释,分离及培养方法同上。主要观察指标:显微镜下观察第3代培养的间充质干细胞形态变化;四甲基偶氮唑盐法测定细胞生长曲线;碱性磷酸酶染色观察间充质干细胞向成骨的分化。结果:①分离的脐血接种到培养瓶中的白膜层细胞在两三天时开始贴壁,2周左右达到80%～90%汇合。细胞形态不均一,随培养时间延长,细胞体积逐渐增大伸展;骨髓间充质干细胞大部分于24h内贴壁。倒置显微镜下可见贴壁细胞呈圆形,有小的胞浆突起。瑞特染色后,可见成纤维样细胞形态,细胞呈平行排列生长或漩涡状生长,与脐血间充质干细胞相比,贴壁早,增殖快。②电镜观察可见间充质干细胞为成纤维样细胞,为长形或梭形,少数细胞核质比大,胞浆少,核仁明显,具有干细胞特征。③在细胞生长的对数期,脐血和骨髓间充质干细胞倍增时间分别为150h和50h。④脐血和骨髓间充质干细胞成功诱导后细胞形态由原来的梭形变成了立方形,随着细胞生长形成结节结构,碱性磷酸酶染色阳性。结论:两种不同来源的间充质干细胞均具有自我更新及多向分化的能力。骨髓间充质干细胞支持造血、促进造血功能恢复和重建造血的功能强于脐血间充质干细胞。