中枢神经系统靶向性CuZn-SOD的构建和表达

来源 :生物化学与生物物理学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yd126523
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SOD对中风等由氧自由基毒性引起的神经性紊乱有保护作用 ,但因血脑屏障使血液中的SOD不能进入中枢神经系统。靶向性SOD可能是进入该系统的途径之一。将人CuZn SODcDNA与破伤风毒素C部分基因融合 ,分别整合进pET 2 2b(+ )及pFastBacHTb载体中 ,并分别在E .coli及粉纹夜蛾Tn 5B1 4细胞中表达。表达产物分子量为 6 8kD ,与理论计算值相符。蛋白质印迹实验证实 ,其表达产物能与人CuZn SOD多克隆抗体及抗破伤风毒素全毒素抗体有免疫反应。在Tn细胞中高效表达 ,表达产物占可溶性总蛋白质的 2 0 % ,表达产物有SOD活性 ,且具有逆行轴突运输的能力。这为靶向性SOD的进一步应用创造了条件 SOD has a protective effect on neurological disorders such as stroke caused by oxygen free radical toxicity, but the SOD in the blood can not enter the central nervous system due to the blood-brain barrier. Targeted SOD may be one of the ways to enter the system. Human CuZn SODcDNA was fused with tetanus toxin C gene and integrated into pET2b (+) and pFastBacHTb vectors, respectively, and expressed in E.coli and Trichoplusia ni Tn 5Bl4 cells respectively. The expressed product had a molecular weight of 68 kD, which was consistent with the calculated value. Western blotting experiments confirmed that the expression product of human CuZn SOD polyclonal antibody and anti-tetanus toxin holotoxin antibody immune response. Highly expressed in Tn cells, the expression product accounted for 20% of the total soluble protein, the expression product has SOD activity, and have the ability of retrograde axonal transport. This creates the conditions for the further application of targeted SOD
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