【摘 要】
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目的 探讨二磷酸腺苷依赖葡糖激酶反义RNA1(ADPGK-AS1)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 培养人胃黏膜上皮正常细胞系GES-1和胃癌细胞系AGS、HGC-27和Hs-746T,实时
【机 构】
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224000 江苏省盐城市第二人民医院外科;江苏省肿瘤医院普外科
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目的 探讨二磷酸腺苷依赖葡糖激酶反义RNA1(ADPGK-AS1)对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 培养人胃黏膜上皮正常细胞系GES-1和胃癌细胞系AGS、HGC-27和Hs-746T,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中ADPGK-AS1和微小RNA-1301-3p(miR-1301-3p)表达水平.转染ADPGK-AS1小干扰RNA或miR-1301-3p模拟物至HGC-27细胞,四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、流式细胞术和蛋白印迹(Western blot)分别检测沉默ADPGK-AS1或过表达miR-1301-3p对HGC-27细胞增殖、凋亡及增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67、剪切型聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(Cleaved PARP)、剪切型半胱天冬酶-3(Cleaved caspases-3)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化p53(p-p53)蛋白表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证ADPGK-AS1与miR-1301-3p调控关系.结果 与GES-1细胞比较,胃癌细胞AGS、HGC-27和Hs-746T中ADPGK-AS1表达水平升高(P<0.05),miR-1301-3p表达水平降低(P<0.05).沉默ADPGK-AS1或过表达miR-1301-3p后,HGC-27细胞存活率及PCNA、Ki-67和Cleaved caspase-3蛋白表达降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved PARP蛋白表达升高(P<0.05).沉默ADPGK-AS1还可促进HGC-27细胞p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)信号途径蛋白p-p38和p-p53表达(P<0.05).ADPGK-AS1在HGC-27细胞中靶向负调控miR-1301-3p表达.抑制miR-1301-3p表达降低了沉默ADPGK-AS1对HGC-27细胞增殖、凋亡及PCNA、Ki-67、Cleaved caspase-3、Cleaved PARP、p-p38和p-p53表达的影响.结论 沉默ADPGK-AS1表达抑制胃癌细胞增殖,并促进细胞凋亡,其机制与靶向上调miR-1301-3p表达和激活p38MAPK信号通路有关.
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