【摘 要】
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[目的]建立一种高效、简便制备双脱氧核苷（ddATP、ddTTP、ddGTP和ddCTP）封闭寡聚核苷酸的方法。[方法]选取乙醛脱氢酶（ALDH）基因,设计特异性上、下游引物。使用末端转移酶和碱性磷酸酶对引物进行双脱氧核苷修饰,利用荧光定量PCR对制备的封闭引物进行验证,并结合校读PCR对突变体进行检测。[结果]经过ddNTP封闭的引物,在普通荧光PCR体系中无法进行引物延伸;在校读PCR体系中则
【基金项目】
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国家科技重大专项（“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”,No.2017ZX10101001-005-001,No.2017ZX10103009-002）；
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[目的]建立一种高效、简便制备双脱氧核苷（ddATP、ddTTP、ddGTP和ddCTP）封闭寡聚核苷酸的方法。[方法]选取乙醛脱氢酶（ALDH）基因,设计特异性上、下游引物。使用末端转移酶和碱性磷酸酶对引物进行双脱氧核苷修饰,利用荧光定量PCR对制备的封闭引物进行验证,并结合校读PCR对突变体进行检测。[结果]经过ddNTP封闭的引物,在普通荧光PCR体系中无法进行引物延伸;在校读PCR体系中则可以区分ALDH2的两种等位基因。[结论]该方法可以高效合成4种双脱氧核苷封闭的寡聚核苷酸,并且这种封闭的引物可以结合校读PCR对单核苷多态性进行检测。
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