本研究拟探讨miRNA-140-5p在肾母细胞瘤增殖过程中的调控作用以及TGFBR1和FGF9蛋白参与此过程的作用机制。
方法采用miRNA芯片技术分析肾母细胞瘤患儿肿瘤组织和瘤旁正常组织的miRNA表达谱，结合生物信息学预测和文献报道，选取表达差异显著的miRNA-140-5p作为研究对象，扩大样本进行Real-time PCR验证；MTS方法检测miRNA-140-5p对细胞增殖率的影响；双荧光素酶实验验证miRNA-140-5p的直接下游靶基因；Western-blot法检测TGFBR1蛋白表达；ELISA法检测细胞上清中FGF9蛋白表达。
结果发现与瘤旁组织相比，miRNA-140-5p在肾母细胞瘤组织和瘤旁正常组织的相对表达量分别为1.69±0.83和6.37±3.25，肾母细胞瘤组miRNA-140-5p的表达量明显降低(P<0.05)。在肾母细胞瘤细胞株G401及SK-NEP-1中，发现过表达miRNA-140-5p可有效降低G401及SK-NEP-1的增殖率，将miRNA无关序列(miRNA-con)转染组细胞增殖率设为100%，与其相比，转染miRNA-140-5p的G401细胞组的增殖率为(87±15)%比(100±20)%，SK-NEP-1细胞组为(91±12)%比(100±9)%，组间比较，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。利用生物信息学软件对miRNA-140-5p直接下游靶基因进行预测，结合肾母细胞瘤相关基因，选择TGFBR1和FGF9基因为miRNA-140-5p的直接下游靶基因；通过双荧光素酶实验证实miRNA-140-5p可直接靶向TGFBR1和FGF9基因。将miRNA-con转染组TGFBR1蛋白表达量设为1，与其相比，过表达miRNA-140-5p的G401及SK-NEP-1细胞内，TGFBR1蛋白表达量降低(G401细胞降为0.67；SK-NEP-1细胞降为0.87)(P<0.05)。与miRNA-con转染对照组相比，G401及SK-NEP-1细胞上清中FGF9蛋白表达量下降，G401组为(478.66±66.32)pg/ml比(535.64±78.53)pg/ml，SK-NEP-1细胞组为(486.57±71.01)pg/ml比(601.26±77.68)pg/ml，组间比较，差异均有统计学意义(P值均<0.05)。
结论患儿肾母细胞瘤中miRNA-140-5p表达量低于瘤旁正常组织，miRNA-140-5p影响肾母细胞瘤细胞的增殖，TGFBR1和FGF9蛋白可能参与了miRNA-140-5p调控肾母细胞瘤细胞增殖的过程。