【摘 要】
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目的构建和鉴定针对VEGF的发卡样siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA。方法人工合成一对互补并编码相应短发夹状VEGF-siRNA的寡核苷酸链，将其插入到pSilencer^TM 2．1-U6 neo载体中
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属防和医院皮肤科,安徽医科大学第一附属医院皮肤科
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目的构建和鉴定针对VEGF的发卡样siRNA真核表达载体pU-VEGF-siRNA。方法人工合成一对互补并编码相应短发夹状VEGF-siRNA的寡核苷酸链，将其插入到pSilencer^TM 2．1-U6 neo载体中，经测序鉴定所构建的重组载体是否正确；采用电转染方法将构建的重组载体导入人恶性黑素瘤细胞系A375和人结（直）肠癌细胞系LOVO细胞中，用G418筛选得到稳定表达VEGF-siRNA的细胞；采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、ELISA法分别检测转染细胞VEGF mRNA和蛋白的表达变化
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