【摘 要】
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目的构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与小鼠热休克蛋白70（mHSP70）融合蛋白6B11ScFv/mHSP70,并初步鉴定其免疫活性。方法根据Genebank上已发表的mHSP70基因序列（NM010478）合成
【机 构】
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北京大学人民医院妇科肿瘤中心,北京市卫生局科教处,首都医科大学附属北京妇产医院,
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目的构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与小鼠热休克蛋白70（mHSP70）融合蛋白6B11ScFv/mHSP70,并初步鉴定其免疫活性。方法根据Genebank上已发表的mHSP70基因序列（NM010478）合成引物行PCR扩增,以扩增所得mHSP70基因插入pET30a（+）-6B11ScFv质粒后转化入E.coliDH5α,获得pET30a（+）-6B11ScFv/mHSP70重组质粒。将鉴定正确的pET30a（+）-6B11ScFv/mHSP70重组质粒转化入E.coliBL21（DE3）,获得E.coliBL21（DE3）[pET30a（+）-6B11ScFv/mHSP70]重组菌株。以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达并行SDS-PAGE分析,对表达产物进行复性和Ni2+-NTA柱亲和层析纯化后,采用蛋白质印迹法和ELISA方法进行鉴定和免疫活性检测。结果6B11ScFv/mHSP70融合基因测序结果基本与理论序列相符。SDS-PAGE分析显示,重组菌株表达产物相对分子质量与预期相符。复性、亲和层析纯化后的蛋白复性率达20.9%,蛋白纯度达95%以上。蛋白质印迹分析证实6B11ScFv/mHSP70融合蛋白相对分子质量为104000,ELISA检测表明其具有6B11ScFv和mHSP70的免疫活性。结论构建表达的6B11ScFv/mHSP70融合蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其体内外抗卵巢癌活性奠定了基础。
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