【摘 要】
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通过PCR方法从pCAMBIA1305载体上克隆了新霉素磷酸转移酶基因nptⅡ的全编码序列,并插入到原核表达载体pET30a（＋）中,构建了重组质粒pET30a-nptⅡ。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3
【基金项目】
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转基因生物新品种培育重大专项资助项目(2009ZX08012-010B,2008ZX08012-04,2008ZX08001-002);中央级公益性科研院所专项基金资助项目(2009RG004-4)
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通过PCR方法从pCAMBIA1305载体上克隆了新霉素磷酸转移酶基因nptⅡ的全编码序列,并插入到原核表达载体pET30a（＋）中,构建了重组质粒pET30a-nptⅡ。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）宿主菌,经IPTG诱导,获得了相对分子量为35kD的表达蛋白,约占全菌总蛋白的45%。表达蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。用5mmol/L二硫苏糖醇和1%十二烷基肌氨酸钠变性溶解包涵体,经透析后复性获得了可溶性重组蛋白。将可溶的表达蛋白用Ni 2＋-NTA亲和层析纯化,获得纯化的NPTⅡ蛋白,电
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