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结核分支杆菌基因组DNA指纹技术,可以在种、株水平对结核分支杆菌进行鉴定,因此在结核病学的多个领域,尤其是流行病学中有很大的应用价值。 一、结核分支杆菌基因组DNA指纹技术及标准方法的确立 将结核分支杆菌的基因组DNA采用特殊的技术切割成大小不同的片段,电泳分离,就可以清楚地看到像人的皮肤指纹一样具有特征性的条带。这就是结核分支杆菌的DNA指纹。建立结核分支杆菌DNA指纹的主要技术有:限制性片段长度多态性(RFLP)方法和聚合酶链反应(PCR)方法。RFLP方法为:针对结核分支杆菌基因组DNA上的特征片段,如插入序列IS6110[1]、IS1081[2],多态性富含GC重复序列[3],(GTG)5寡聚脱氧核苷酸[4]等,利用限制性内切酶酶切特征性片段上的某一位点,电泳分离、Southern blot而形成结核分支杆菌DNA指纹图谱。该方法具有良好的特异性和稳定性,已成为结核分支杆菌株水平鉴定的主要方法[5,6]。PCR方法为:针对结核分支杆菌基因组DNA上的特征片段,如IS6110、DR[7]、16S rDNA[8],设计特异的引物进行多种方式的聚合酶链反应,电泳分离,而形成结核分支杆菌DNA指纹图谱。该方法简单快速,但特异性和稳定性不及RFLP方法,目前作为RFLP方法的补充。