【摘 要】
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目的建立MYCT-1基因的实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测方法,检测RNA干扰(RNA interference,RNAi)后GES-1细胞中MYCT-1mRNA的表达水平
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目的建立MYCT-1基因的实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测方法,检测RNA干扰(RNA interference,RNAi)后GES-1细胞中MYCT-1mRNA的表达水平,探讨不同剂量siRNA对MYCT-1基因的沉默效果。方法取5×104对数生长期GES-1细胞,分别转染1μg、2μg、4μg siRNA。转染第4天分别收集细胞提取总RNA,合成cDNA并进行RFQ-PCR检测,以未转染组作为对照。结果加入1μg、2μg组MYCT-1表达量分别降低19.4%和55.2%,加入4μg siRNA组细胞死亡。结论成功建立了MYCT-1基因的RFQ-PCR检测方法。加入2μg siRNA,脂质体与siRNA比例为4:1时,可使GES-1细胞中MYCT-1表达降低55.2%,为最佳实验条件。
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