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摘要：目的：本研究旨在通过将生肌玉红膏和生理盐水的疗效进行对比，进而阐述生肌玉红膏促进大鼠背部人粪污染创面愈合的作用机制。方法：将96只有背部人粪污染创面的大鼠随机分成2组，分别予生肌玉红膏(治疗组)和生理盐水(对照组)换药，分别测定2组造模后3、7、14 d和完全愈合时创面的碱性纤维细胞生长因子(bFGF)、羟脯氨酸(Hyp)含量，并记录创面愈合时间和计算造模后3、7、14 d的创面愈合率。结果：造模后3 d，治疗组创面的bFGF、Hyp含量高于对照组(P<0.05)。造模后7 d，治疗组创面的bFGF、Hyp含量明显高于对照组(P<0.01)。造模后14 d，治疗组创面的bF-GF、Hyp含量低于对照组(P<0.05)。完全愈合时2组创面的bFGF、Hyp含量无统计学差异(P>0.05)。治疗组的创面_愈合时间少于对照组(P<0.05)，造模后3、7、14 d治疗组创面愈合率均比对照组高。结论：生肌玉红膏具有促进大鼠创面愈合的作用，其机制与其影响创面肉芽组织中的胶原蛋白和生长因子的合成有关。
关键词：生肌玉红膏；创面愈合；bFGF；Hyp
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1007-2349(2010)05-0058-02
因为肛周术后创面开放，易污染，所以愈合迟缓，而生肌玉红膏能祛腐生肌，常用于肛肠科的换药。本文以动物实验对其作用机制进行阐述，从而为临床治疗提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 药品及试剂(1)生肌玉红膏(北京同仁堂集团有限责任公司)，批号：国药准字Z11021309。纱条由本院制剂室提供。将药膏及纱条同置于消毒器皿中备用(药膏经高温烊化后，即可均匀涂于纱条表面)。(2)大鼠bFGF和Hyp的ELISA试剂盒(均由上海亿欣生物科技有限公司提供)，批号分别为YX01598E和YX01848E。(3)酶标仪(美国ThermoFisher Scientific中国分公司提供)，型号MK3。
1.2 实验动物SD雄性大鼠96只，月龄5～6个月，体重220～260 g，由上海西普尔一必凯实验动物有限公司提供(合格证号0060960，0066518)。动物常规饲养，室温22℃。
1.3 实验方法
1.3.1 造模大鼠在手术前禁食12 h，均经2.5％戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉，背部皮肤脱毛后，通过锐性手术剪制作深达皮肤全层、肌筋膜的圆形创面一个，创面大小为2 cm×2 cm，常规处理止血，然后在创面上滴粪稀释液1 mL(正常人新鲜粪便10 g，加生理盐水5 mL，混匀，离心，取上清液，现配现用)，以油纱布、无菌砂条、胶带包扎固定，24 h后去除敷料，见创面有脓性分泌物，有粪臭味者为造模成功。以后每次换药前1 h均在创面上滴粪液1 mL。
1.3.2
分组和取材96只造模鼠随机平均分为2组，每日定时换药1次。治疗组先用5mL 0.9％NS冲洗伤口1 min，随后以与创面等大的生肌玉红膏纱条敷于创面上，胶带包扎固定。对照组只予生理盐水冲洗，再予消毒纱条及胶带包扎固定。于造模后3、7、14 d 2组每天分别随机处死大鼠12只，其余12只大鼠待创面完全愈合后处死。沿处死大鼠的正常皮肤边缘切下全部组织，并仔细分离其中肉芽组织，以待测定分析。
1.4 检测指标
1.4.1 创面愈合时间记录创面完全愈合时间，以完全上皮覆盖作为创面愈合时间的确定依据。
1.4.2 创面愈合率通过数码相机进行创面照相，经Photoshop处理后分别测出造模时和造模后3、7、14 d的创面面积，再计算创面愈合率(％)＝(造模时创面面积－测定时创面面积)/造模时创面面积X 100。
1.4.3 Hyp和bFGF含量分别在造模后3、7、14 d，以及创面完全愈合时，取待测标本，检测步骤按试剂盒说明。
1.5 统计学方法所有数据均用SPSS13.0软件进行统计分析，均采用t检验。
2 结果
2.1.2 组大鼠创面愈合时间比较治疗组愈合时间少于对照组(P<0.01)。见表1。
2.2 2组大鼠创面愈合率比较治疗组创面愈合率均高于对照组，造模后3 d有差异(P<0.05)，造模后7、14 d差异明显(P<0.01)。见表2。
2.3 2组大鼠创面Hyp、bFGF含量比较造模后3 d，治疗组的Hyp、bFGF含量均高于对照组(P<0.05)。造模后7 d，治疗组的Hyp、bFGF含量均明显高于对照组(P<0.01)。造模后14 d，治疗组的Hyp、bFGF治疗组的Hyp含量均低于对照组(P<0.05)。完全愈合时2组的Hyp、bFGF含量均无差异(P>0.05)。见表3、表4。
3 讨论
肛周疾病术后通常不缝合创面，故易受粪便污染。潮湿的环境加上肠内细菌造成的炎症会导致创面愈合迟缓，中医药对此有独特疗效。中医认为，肛门术后不洁，外感邪毒，或夹内热，下注肛门，久则致气滞血瘀，经络阻滞。故肛周疾病术后治以活血通络、祛腐生肌、清热解毒为要。生肌玉红膏就兼有这些功效，该方源自《外科正宗》，由当归60 g，紫草6 g，血竭12 g，白蜡60 g，白芷15 g，甘草36 g，轻粉12(含氯化亚汞)组成。方中当归、血竭能活血通络、祛瘀消肿，配白芷、轻粉攻毒散结、消肿止痛，使血行脉通，瘀腐自去。再取紫草清热凉血，甘草解毒，缓和药性。诸药合用，共奏活血散瘀、祛腐解毒、生肌敛疮之功效。现代药理证明：汞制剂在低浓度时对创面有温和的刺激作用，可改善微循环，提供组织修复必需的氧及营养，而当归、血竭也能增加创面血供和营养，因而能共同促进创面愈合。紫草、白芷、甘草对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等病原微生物有抑制作用。选择白蜡为基质，除润滑作用外，还能保护肉芽组织，减轻刺激，促进上皮细胞再生。油膏能润泽疮口皮肤，使创面平整，减少疤痕。
现代医学认为创面愈合分为3个阶段：(1)炎症反应期；(2)肉芽组织形成期，包括胶原的合成和细胞的增殖；(3)重组期，包括胶原及细胞的重组，其中第2阶段最关键。Hyp是胶原的主要成分，在胶原蛋白中含量固定，约10％，其含量能直接反映胶原的含量和动态变化。本实验结果表明：在造模后3 d，治疗组创面Hyp水平稍高于对照组，可能在创面愈合的炎症期，渗出的粒细胞释放了胶原酶，溶解了部分胶原组织，使Hyp无法充分表达。而在造模后7 d(肉芽组织形成期)，治疗组创面Hyp水平明显高于对照组，表明新生胶原合成旺盛，说明生肌玉红膏可促进创面中胶原的合成。但在造模后14 d(重组期)，治疗组创面Hyp水平稍低于对照组，说明生肌玉红膏还可防止胶原过度增生，以减少瘢痕形成。
有研究表明，bFGF参与创伤修复的机制主要为：(1)通过与相应的受体结合，既可使毛细血管内皮细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞迅速增殖，又可改善局部血液循环和组织营养状况，从而促进创伤部位新生肉芽组织的生长；(2)可以刺激表皮细胞生长因子，从而加速创面的愈合。上皮再生后又反馈抑制胶原的合成，为胶原纤维的有序塑形，减少疤痕堆积做出物质上的准备。实验表明：在造模后3、7 d(炎症和肉芽组织形成期)，生肌玉红膏可增加小鼠创面中bFGF水平，从而促进创面胶原的合成和上皮的生长；但在造模后14 d(重组期)，又可降低bFGF水平，促进过度增生的胶原降解，使其排列有序，以减少瘢痕形成。
本论文通过模拟临床术后创面污染的情况，建立创面模型，通过用生肌玉红膏换药来观察它对创面愈合的影响，进而阐述其作用机制：此药能在创面愈合的炎症和肉芽组织形成期促进bFGF和Hyp的生成，而在重组期减少其生成。这样既能加速创面愈合，又能减少疤痕产生。
当然，创面愈合还需控制感染，改变潮湿环境等。而生肌玉红膏中的轻粉有长时间的强烈抑菌作用，并能减少创面的粘液分泌，从而保持创面的干燥；而紫草、白芷、甘草也有抑菌作用，这对创面愈合也有促进作用，相关研究有待深入进行。
关键词：生肌玉红膏；创面愈合；bFGF；Hyp
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1007-2349(2010)05-0058-02
因为肛周术后创面开放，易污染，所以愈合迟缓，而生肌玉红膏能祛腐生肌，常用于肛肠科的换药。本文以动物实验对其作用机制进行阐述，从而为临床治疗提供科学依据。
1 材料和方法
1.1 药品及试剂(1)生肌玉红膏(北京同仁堂集团有限责任公司)，批号：国药准字Z11021309。纱条由本院制剂室提供。将药膏及纱条同置于消毒器皿中备用(药膏经高温烊化后，即可均匀涂于纱条表面)。(2)大鼠bFGF和Hyp的ELISA试剂盒(均由上海亿欣生物科技有限公司提供)，批号分别为YX01598E和YX01848E。(3)酶标仪(美国ThermoFisher Scientific中国分公司提供)，型号MK3。
1.2 实验动物SD雄性大鼠96只，月龄5～6个月，体重220～260 g，由上海西普尔一必凯实验动物有限公司提供(合格证号0060960，0066518)。动物常规饲养，室温22℃。
1.3 实验方法
1.3.1 造模大鼠在手术前禁食12 h，均经2.5％戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉，背部皮肤脱毛后，通过锐性手术剪制作深达皮肤全层、肌筋膜的圆形创面一个，创面大小为2 cm×2 cm，常规处理止血，然后在创面上滴粪稀释液1 mL(正常人新鲜粪便10 g，加生理盐水5 mL，混匀，离心，取上清液，现配现用)，以油纱布、无菌砂条、胶带包扎固定，24 h后去除敷料，见创面有脓性分泌物，有粪臭味者为造模成功。以后每次换药前1 h均在创面上滴粪液1 mL。
1.3.2
分组和取材96只造模鼠随机平均分为2组，每日定时换药1次。治疗组先用5mL 0.9％NS冲洗伤口1 min，随后以与创面等大的生肌玉红膏纱条敷于创面上，胶带包扎固定。对照组只予生理盐水冲洗，再予消毒纱条及胶带包扎固定。于造模后3、7、14 d 2组每天分别随机处死大鼠12只，其余12只大鼠待创面完全愈合后处死。沿处死大鼠的正常皮肤边缘切下全部组织，并仔细分离其中肉芽组织，以待测定分析。
1.4 检测指标
1.4.1 创面愈合时间记录创面完全愈合时间，以完全上皮覆盖作为创面愈合时间的确定依据。
1.4.2 创面愈合率通过数码相机进行创面照相，经Photoshop处理后分别测出造模时和造模后3、7、14 d的创面面积，再计算创面愈合率(％)＝(造模时创面面积－测定时创面面积)/造模时创面面积X 100。
1.4.3 Hyp和bFGF含量分别在造模后3、7、14 d，以及创面完全愈合时，取待测标本，检测步骤按试剂盒说明。
1.5 统计学方法所有数据均用SPSS13.0软件进行统计分析，均采用t检验。
2 结果
2.1.2 组大鼠创面愈合时间比较治疗组愈合时间少于对照组(P<0.01)。见表1。
2.2 2组大鼠创面愈合率比较治疗组创面愈合率均高于对照组，造模后3 d有差异(P<0.05)，造模后7、14 d差异明显(P<0.01)。见表2。
2.3 2组大鼠创面Hyp、bFGF含量比较造模后3 d，治疗组的Hyp、bFGF含量均高于对照组(P<0.05)。造模后7 d，治疗组的Hyp、bFGF含量均明显高于对照组(P<0.01)。造模后14 d，治疗组的Hyp、bFGF治疗组的Hyp含量均低于对照组(P<0.05)。完全愈合时2组的Hyp、bFGF含量均无差异(P>0.05)。见表3、表4。
3 讨论
肛周疾病术后通常不缝合创面，故易受粪便污染。潮湿的环境加上肠内细菌造成的炎症会导致创面愈合迟缓，中医药对此有独特疗效。中医认为，肛门术后不洁，外感邪毒，或夹内热，下注肛门，久则致气滞血瘀，经络阻滞。故肛周疾病术后治以活血通络、祛腐生肌、清热解毒为要。生肌玉红膏就兼有这些功效，该方源自《外科正宗》，由当归60 g，紫草6 g，血竭12 g，白蜡60 g，白芷15 g，甘草36 g，轻粉12(含氯化亚汞)组成。方中当归、血竭能活血通络、祛瘀消肿，配白芷、轻粉攻毒散结、消肿止痛，使血行脉通，瘀腐自去。再取紫草清热凉血，甘草解毒，缓和药性。诸药合用，共奏活血散瘀、祛腐解毒、生肌敛疮之功效。现代药理证明：汞制剂在低浓度时对创面有温和的刺激作用，可改善微循环，提供组织修复必需的氧及营养，而当归、血竭也能增加创面血供和营养，因而能共同促进创面愈合。紫草、白芷、甘草对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等病原微生物有抑制作用。选择白蜡为基质，除润滑作用外，还能保护肉芽组织，减轻刺激，促进上皮细胞再生。油膏能润泽疮口皮肤，使创面平整，减少疤痕。
现代医学认为创面愈合分为3个阶段：(1)炎症反应期；(2)肉芽组织形成期，包括胶原的合成和细胞的增殖；(3)重组期，包括胶原及细胞的重组，其中第2阶段最关键。Hyp是胶原的主要成分，在胶原蛋白中含量固定，约10％，其含量能直接反映胶原的含量和动态变化。本实验结果表明：在造模后3 d，治疗组创面Hyp水平稍高于对照组，可能在创面愈合的炎症期，渗出的粒细胞释放了胶原酶，溶解了部分胶原组织，使Hyp无法充分表达。而在造模后7 d(肉芽组织形成期)，治疗组创面Hyp水平明显高于对照组，表明新生胶原合成旺盛，说明生肌玉红膏可促进创面中胶原的合成。但在造模后14 d(重组期)，治疗组创面Hyp水平稍低于对照组，说明生肌玉红膏还可防止胶原过度增生，以减少瘢痕形成。
有研究表明，bFGF参与创伤修复的机制主要为：(1)通过与相应的受体结合，既可使毛细血管内皮细胞、成纤维细胞、血管平滑肌细胞迅速增殖，又可改善局部血液循环和组织营养状况，从而促进创伤部位新生肉芽组织的生长；(2)可以刺激表皮细胞生长因子，从而加速创面的愈合。上皮再生后又反馈抑制胶原的合成，为胶原纤维的有序塑形，减少疤痕堆积做出物质上的准备。实验表明：在造模后3、7 d(炎症和肉芽组织形成期)，生肌玉红膏可增加小鼠创面中bFGF水平，从而促进创面胶原的合成和上皮的生长；但在造模后14 d(重组期)，又可降低bFGF水平，促进过度增生的胶原降解，使其排列有序，以减少瘢痕形成。
本论文通过模拟临床术后创面污染的情况，建立创面模型，通过用生肌玉红膏换药来观察它对创面愈合的影响，进而阐述其作用机制：此药能在创面愈合的炎症和肉芽组织形成期促进bFGF和Hyp的生成，而在重组期减少其生成。这样既能加速创面愈合，又能减少疤痕产生。
当然，创面愈合还需控制感染，改变潮湿环境等。而生肌玉红膏中的轻粉有长时间的强烈抑菌作用，并能减少创面的粘液分泌，从而保持创面的干燥；而紫草、白芷、甘草也有抑菌作用，这对创面愈合也有促进作用，相关研究有待深入进行。