【摘 要】
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目的:研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用.方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF.用lipofectamine2000
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目的:研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用.方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF.用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-MIF)细胞,用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA表达水平.将pcDNA3-antiMIF转化人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),建立可表达MIF反义RNA的HUVECs(HUVECs-an-tiMIF)细胞.将MIF的真核表达载体pSecTag-MIF转染HUVECs-antiMIF,用Real-time定量PCR鉴定MIF mR-NA的表达水平.结果:正确构建了MIF反义RNA的表达载体pcDNA3-antiMIF.MIF反义RNA对293-MIF细胞中MIF表达的抑制水平达32%(P＜0.05).建立稳定表达MIF反义RNA的HUVECs-antiMIF细胞株.HUVECs-antiMIF中MIF的表达受到抑制,表达水平降低40%(P＜0.05).结论:表达载体介导的反义RNA能有效地抑制MIF的表达,建立了稳定表达MIF反义RNA的HUVECs.
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