【摘 要】
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目的构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因RNA干扰的真核表达载体,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,并鉴定其干扰效果。方法选择设计2条针对小鼠PPARγ基因的干扰靶序列,构建真核表达载体PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,以PCR鉴定并进行序列分析。证实质粒构建成功后,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(eGFP)的表达,计算转染效率;采用实时定量PCR法和Western印迹检测载体对PPARγ基因的表达干扰效果;采用油红染色观察PPARγ在脂肪细
【机 构】
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漯河市中心医院内分泌科,南京医科大学第一附属医院老年医学内分泌科
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目的构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因RNA干扰的真核表达载体,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,并鉴定其干扰效果。方法选择设计2条针对小鼠PPARγ基因的干扰靶序列,构建真核表达载体PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,以PCR鉴定并进行序列分析。证实质粒构建成功后,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(eGFP)的表达,计算转染效率;采用实时定量PCR法和Western印迹检测载体对PPARγ基因的表达干扰效果;采用油红染色观察PPARγ在脂肪细
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