【摘 要】
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目的 探讨miR-499a-5p高表达靶向基质金属蛋白酶-16(MMP-16)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺损伤的影响.方法 实验设置假手术组、模型组、miR-499a-5p模拟物组、MMP-16组、miR-499a-5p模拟物+MMP-16组、Nrf2信号通路抑制剂D-呋喃核糖基苯并咪唑(DRB)组、miR-499a-5p模拟物+DRB组.利用盲肠穿刺的方法构建急性呼吸窘迫综合征大鼠模型,术前1h,用微型注射器将50 μL的转染复合物注入气管,术前30 min,腹腔注射DRB(5mg/kg).R
【机 构】
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西南医科大学附属医院重症医学科 四川泸州646000;西南医科大学附属医院药学部 四川泸州646000
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目的 探讨miR-499a-5p高表达靶向基质金属蛋白酶-16(MMP-16)对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠肺损伤的影响.方法 实验设置假手术组、模型组、miR-499a-5p模拟物组、MMP-16组、miR-499a-5p模拟物+MMP-16组、Nrf2信号通路抑制剂D-呋喃核糖基苯并咪唑(DRB)组、miR-499a-5p模拟物+DRB组.利用盲肠穿刺的方法构建急性呼吸窘迫综合征大鼠模型,术前1h,用微型注射器将50 μL的转染复合物注入气管,术前30 min,腹腔注射DRB(5mg/kg).RT-qPCR检测肺组织中miR-499和MMP-16表达水平;双荧光素酶报告基因验证靶向关系;分离模型组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,MMP-163\'UTR WT和MUT荧光素酶报告质粒分别与miR-499共转染肺泡Ⅱ型上皮细胞,验证miR-499和MMP-16靶向关系;苏木素-伊红染色观察肺损伤;酶联免疫吸附试验检测支气管肺泡灌洗液中炎症因子和肺组织中氧化应激水平;蛋白印迹法分析肺组织中还原型辅酶/醌氧化还原酶(NQO1)、血红素加氧酶(HO)-1、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达水平.结果 miR-499在ARDS模型大鼠的肺中低表达(P＜0.01),而MMP-16高表达(P＜0.01);miR-499a-5p与MMP-163\'UTR区存在结合位点,且miR-499a-5p直接靶向负调控MMP-16表达(P＜0.01);miR-499a-5p过表达能够明显降低ARDS大鼠的肺湿干重比(P＜0.05),减轻肺组织损伤(P＜0.01),降低支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6含量(P＜0.01),降低肺组织中丙二醛和髓过氧化物酶水平,提高总抗氧化能力(P＜0.01),上调肺组织中NQO1、HO-1、Nrf2蛋白表达(P＜0.01).而加入MMP-16和DRB后都能够明显逆转该现象.结论 miR-499a-5p过表达靶向负调控MMP-16,通过激活Nrf2信号通路来减轻急性呼吸窘迫综合征大鼠的肺损伤.
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