【摘 要】
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目的探索糖原合成激酶-3β(GSK-3β)/β-连环蛋白信号通路对贫铀(depleted uranium, DU)致人肾近曲小管上皮HK-2细胞损伤的作用。方法不同浓度DU染毒HK-2细胞3～24 h，采用免疫荧光法检测肾损伤分子-1(KIM-1)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)表达水平以观察DU诱导HK-2细胞的损伤，免疫荧光法检测β-连环蛋白核转位，Western blot法检测
【机 构】
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200032 上海，复旦大学放射医学研究所放射生物部,200032 上海，复旦大学放射医学研究所放射生物部,200032 上海，复旦大学放射医学研究所放射生物部,200032 上海，复旦大学放射医学研
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目的探索糖原合成激酶-3β(GSK-3β)/β-连环蛋白信号通路对贫铀(depleted uranium, DU)致人肾近曲小管上皮HK-2细胞损伤的作用。
方法不同浓度DU染毒HK-2细胞3～24 h，采用免疫荧光法检测肾损伤分子-1(KIM-1)和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)表达水平以观察DU诱导HK-2细胞的损伤，免疫荧光法检测β-连环蛋白核转位，Western blot法检测p-GSK-3β(S9)、GSK-3β、β-连环蛋白及c-myc蛋白表达变化，观察GSK-3β/β-连环蛋白信号通路的时相变化；采用GSK-3β(KD)质粒瞬时转染和GSK-3β特异性抑制剂TDZD-8处理抑制HK-2细胞的GSK-3β活性，采用β-连环蛋白质粒瞬时转染HK-2细胞使其过表达，观察GSK-3β活性和β-连环蛋白表达变化对DU染毒致HK-2细胞损伤的影响。
结果300和600 μmol/L DU染毒致HK-2细胞KIM-1和NGAL阳性细胞率随染毒时间的延长和染毒剂量的增加而增加，染毒后6、9和24 h明显高于空白对照组(KIM-1阳性细胞率：t＝11.06、18.97、30.49, P<0.05；t＝6.79、16.02、85.45, P<0.05；NGAL阳性细胞率：t＝11.78、11.37、34.29, P<0.05；t＝7.34、21.63、36.84, P<0.05)；p-GSK-3β(S9)/GSK-3β比值和核β-连环蛋白阳性细胞率于染毒后3、6、9和24 h明显高于空白对照组[p-GSK-3β(S9)/GSK-3β比值：t＝3.95、4.69、5.40、3.34, P<0.05]；核β-连环蛋白阳性细胞率：t＝4.61、6.52、36.64、14.93, P<0.05)，于染毒后9 h达峰值，还激活了β-连环蛋白下游靶基因c-myc的蛋白表达。瞬时转染GSK-3β(KD)质粒明显抑制了HK-2细胞的GSK-3β活性(t＝8.07, P<0.05)，降低了DU致染毒HK-2细胞的KIM-1阳性细胞率(t＝24.77, P<0.05)。TDZD-8抑制GSK-3β活性的同时提高了β-连环蛋白核转位，亦能显著降低DU染毒诱导HK-2细胞的KIM-1阳性细胞率(t＝6.25、6.73, P<0.05)。而且，β-连环蛋白过表达显著减轻了DU诱导的HK-2细胞损伤(t＝7.48, P<0.05)。
结论GSK-3β/β-连环蛋白信号通路是调控DU致HK-2细胞毒性的关键通路，抑制GSK-3β活性及β-连环蛋白表达能有效拮抗DU诱导的HK-2细胞损伤。
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