【摘 要】
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从呋喃它酮代谢物AMOZ衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体VH和VL基因，通过(G4S)3连接肽采用重叠延伸PCR技术构建单链抗体基因，pET-22b（+）表达载体进行表达，Ni亲和柱进行纯化，制
【机 构】
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南昌市农产品加工与质量控制重点实验室江西农业大学食品科学与工程学院; 广东省食品质量安全重点实验室华南农业大学食品学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金地区基金项目（31660486）
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从呋喃它酮代谢物AMOZ衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体VH和VL基因，通过(G4S)3连接肽采用重叠延伸PCR技术构建单链抗体基因，pET-22b（+）表达载体进行表达，Ni亲和柱进行纯化，制备得到抗AMOZ衍生物单链抗体，采用棋盘滴定试验优化包被原包被浓度和单链抗体稀释度，建立基于此单链抗体的AMOZ残留间接竞争酶联免疫分析方法并对方法进行评价。结果表明：最佳包被抗原浓度和单链抗体稀释度分别为0.0625 μg/mL和20倍；建立的间接竞争酶联免疫分析方法半抑制浓度为8.65 μg/L，线性检测范围2.90～53.28 μg/L，检测限1.48 μg/L；除与原药呋喃它酮有交叉反应外，此单链抗体与其它硝基呋喃类抗生素及其代谢物交叉反应率均小于0.1%，虾肉样品添加回收率为74.3%～86.6%；用高效液相色谱-串联质谱法对免疫测定结果进行确证实验，两种方法相关性良好(R2=0.9992)，说明本文建立的间接竞争酶联免疫分析方法可用于虾类等水产品中AMOZ残留的快速筛查。
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