目的建立一种大鼠海马神经元的分离及原代培养方法,并进行细胞鉴定来确定其特质性,为进行海马神经元的体外研究提供技术支持。方法选用出生24 h内的Wistar大鼠,分离双侧海马,经胰酶消化后用含10%马血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,12h内换成无血清培养基培养48 h,加入阿糖胞苷处理24 h,第5~8天用免疫组织化学法鉴定微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达。结果接种4 h后细胞开始贴壁,有的长出细小突起,胶质细胞生长活跃,换为无血清培养及阿糖胞苷处理后胶质细胞生长抑制,海马神经元生长占优势,随着培养时间的增加,细胞突起逐渐增长及网状联络密集。培养至3周细胞逐渐死亡。MAP-2鉴定表达阳性。结论出生24 h内的乳鼠原代海马神经元的分离及培养方法可靠,可作为神经元体外培养的良好模型,为体外研究提供可靠的技术支持。