【摘 要】
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目的观察胰腺癌Panc-1细胞中诱骗受体3(DcR3)基因沉默对T淋巴细胞功能的影响。方法构建针对DcR3基因的小干扰RNA真核表达载体,脂质体LipofectamineTM 2000介导DcR3干扰质粒转染人胰腺癌Panc-1细胞,转染48 h后采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DcR3的表达变化;与淋巴细胞混合培养72 h后采用流式细胞术检测T细胞亚群
【机 构】
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目的观察胰腺癌Panc-1细胞中诱骗受体3(DcR3)基因沉默对T淋巴细胞功能的影响。
方法构建针对DcR3基因的小干扰RNA真核表达载体,脂质体LipofectamineTM 2000介导DcR3干扰质粒转染人胰腺癌Panc-1细胞,转染48 h后采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测DcR3的表达变化;与淋巴细胞混合培养72 h后采用流式细胞术检测T细胞亚群的变化及Th1、Th2细胞的偏移,ELISA法检测干扰素(IFN)-γ和IL-4水平。
结果与空载体转染组比较,转染靶向DcR3的小干扰RNA(DcR3-siRNA)48 h后的Panc-1细胞中DcR3 m RNA和蛋白表达下降(P< 0.05);沉默DcR3的胰腺癌Panc-1细胞与淋巴细胞混合培养后CD3+ CD4+ T细胞增多(P< 0.05),而CD8+ T细胞无明显变化(P> 0.05);Th1细胞增多[(7.87± 1.07)%比(5.57±0.70)%,P< 0.05],Th2细胞细胞减少[(0.91±0.15)%比(2.83±0.21)%, P< 0.05];细胞上清液中Th1型细胞因子的IFN-γ浓度升高[(20.88±1.32)μg/L比(15.61± 1.26)μg/L,P<0.01],而Th2型细胞因子的IL-4水平下降[(3.27±0.34)μg/L比(5.31±0.37) μg/L,P< 0.01]。
结论在胰腺癌细胞中靶向沉默DcR3的表达,可以有效恢复T淋巴细胞的免疫调节功能,纠正失衡的Th1/Th2细胞因子网络。
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