【摘 要】
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目的 探讨依托咪酯对胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 用不同浓度的依托咪酯处理胶质瘤细胞U251,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测依托咪酯对U251细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测依托咪酯对U251细胞迁移及侵袭的影响;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胶质瘤组织中长链非编码RNA CDKN2B-AS1(LncRNA CDKN2B-AS1)与微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)的表达;采用上述方法检测抑制CDKN2B-AS1的表达或miR-1
【机 构】
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周口市中心医院麻醉科,河南 周口 466000;牡丹江心血管病医院麻醉科;广州前海人寿医院麻醉科;宁夏回族自治区人民医院麻醉科;郑州大学第一附属医院麻醉科
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目的 探讨依托咪酯对胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 用不同浓度的依托咪酯处理胶质瘤细胞U251,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测依托咪酯对U251细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测依托咪酯对U251细胞迁移及侵袭的影响;实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测胶质瘤组织中长链非编码RNA CDKN2B-AS1(LncRNA CDKN2B-AS1)与微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)的表达;采用上述方法检测抑制CDKN2B-AS1的表达或miR-199a-5p过表达对U251细胞增殖、迁移侵袭的影响;双荧光素酶报告实验验证CDKN2B-AS1与miR-199a-5p的靶向调控关系;qRT-PCR检测依托咪酯对CDKN2B-AS1与miR-199a-5p表达的影响,CDKN2B-AS1过表达以此验证依托咪酯对U251细胞增殖、迁移、侵袭的作用;Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21蛋白表达.结果 与Con组相比,依托咪酯不同剂量组U251细胞抑制率显著升高,迁移与侵袭细胞数显著减少,CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,p21表达水平显著升高,且随着依托咪酯使用剂量的增加而显著变化;胶质瘤组织中CDKN2B-AS1的表达水平显著升高,而miR-199a-5p的表达水平显著降低(均P<0.05);抑制CDKN2B-AS1的表达或miR-199a-5p过表达能够抑制U251细胞增殖、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验证明CDKN2B-AS1可靶向结合miR-199a-5p而抑制其表达及活性(P<0.05);依托咪酯可显著提高miR-199a-5p的表达水平,降低CDKN2B-AS1的表达水平(均P<0.05);CDKN2B-AS1过表达可逆转依托咪酯对U251细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用.结论 依托咪酯可通过调控CDKN2B-AS1/miR-199a-5p表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭.
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