【摘 要】
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目的 建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速鉴定检测肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7的方法.方法 应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),针对EHEC O157:H7的0157抗原编码rfbE、志贺样毒素stx2、H7鞭毛抗原编码fli
【机 构】
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310051,杭州,浙江省疾病预防控制中心微生物所,310051,杭州,浙江省疾病预防控制中心微生物所,310051,杭州,浙江省疾病预防控制中心微生物所,310051,杭州,浙江省疾病预防控制中心微
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目的 建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速鉴定检测肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157:H7的方法.方法 应用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),针对EHEC O157:H7的0157抗原编码rfbE、志贺样毒素stx2、H7鞭毛抗原编码fliC基因分别设计引物,并对LAMP反应条件和反应体系进行优化.对2株种系背景明确的实验对照菌EHEC O157:H7标准菌株、17株O157地方分离菌株、33株非O157其他肠道菌株进行检测,并与PCR结果比较,验证该方法的特异性、敏感性.结果 具有相应靶基因的O157菌株经LAMP检测,其结果均与PCR法相同,呈绿色且电泳有相应条带为阳性,非O157其他肠道菌株均检测呈橙色并电泳无相应条带为阴性.该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1.5 h左右,该体系检测限均为26 CFU/反应,而且其检测结果在白光下通过肉眼即可判断.结论 本次建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测监定EHEC O157:H7,无需昂贵的仪器,非常适合基层检验部门及小型实验室与流行病学人员现场监测使用,具有较为广泛地应用前景。
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