鲤浮肿病毒RAA-LFD检测方法的建立

【基金项目】

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北京市农业农村局科技新星计划项目(20190219),北京市创新团队项目(BAIC03-2019),2020年农业科技项目水生动物重大疫病(鲤浮肿病)综合防控技术应用研究,养殖水体水质改良剂的调查、评价和示范

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为建立一种简便、快捷的现地检测鲤浮肿病毒(CEV)的方法,本研究联合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在优选的RAA下游引物和探针的5’端分别进行Biotin和FAM标记,通过RAA反应时间和温度等条件的优化,建立了可用于CEV现地检测的RAA-LFD方法。该检测方法在34℃~40℃恒温反应10 min即可实现对CEV目的基因片段的有效扩增;与其它常见水生动物疫病病原DNA无交叉反应;RAA扩增产物可以直接对LFD经肉眼观察结果,该方法对标准质粒pEASY-CEVP4a的最低检测限为6

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