【摘 要】
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目的 探讨高尔基体蛋白73(GP73)鼠源单克隆抗体的制备方法并进行鉴定.方法 用GP73重组抗原蛋白免疫5只小鼠获得血清抗体,免疫小鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过筛选后选
【机 构】
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首都医科大学附属北京佑安医院北京市肝病研究所 100069
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目的 探讨高尔基体蛋白73(GP73)鼠源单克隆抗体的制备方法并进行鉴定.方法 用GP73重组抗原蛋白免疫5只小鼠获得血清抗体,免疫小鼠脾细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过筛选后选择GP73抗体阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养,通过腹水制备获得高特异性和高效价的GP73单克隆抗体(单抗).结果 成功筛选出11株能稳定分泌特异性GP73单抗的杂交瘤细胞株,经多次复苏传代仍能稳定分泌特异性强、效价高的抗体.11株单抗均能结合天然状态下的GP73蛋白,与无关蛋白均无交叉反应,提示有较强的特异性.应用筛选出的配对GP73单抗可检测出浓度为1ng/ml的GP73基因工程表达抗原.结论 制备的GP73杂交瘤细胞株分泌的抗体对GP73蛋白具有特异亲和性,并且有较高效价,为GP73蛋白诊断试剂的研制提供了关键技术基础.
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