【摘 要】
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目的研究巴曲酶在毕赤酵母菌中的表达。方法按Pichia pastoris偏好密码子人工合成巴曲酶全基因,克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后经电转化转入X-3
【机 构】
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吉林大学,辽宁诺康生物制药有限责任公司
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目的研究巴曲酶在毕赤酵母菌中的表达。方法按Pichia pastoris偏好密码子人工合成巴曲酶全基因,克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后经电转化转入X-33,筛选鉴定转化子,经摇瓶发酵甲醇诱导,酵母菌分泌表达有凝血活性的巴曲酶。经SDS-PAGE电泳确定其分子量为33.0kDa,免疫印迹证明重组巴曲酶具有天然巴曲酶的免疫活性。结果经发酵条件的优化,发酵罐的表达量达到25000Ku/L发酵液,从每升发酵液中可纯化出11.0mg重组巴曲酶。结论巴曲酶毕氏酵母菌成功的构建,为重组巴曲酶止血药的开发奠定了基础。
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