【摘 要】
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目的构建大鼠CB1（r CB1）基因真核表达载体,检测r CB1基因在细胞中的表达,研究r CB1对人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增r CB1基因,通过酶
【机 构】
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重庆医科大学实验动物中心,重庆三峡医药高等专科学校,重庆市啮齿类实验动物工程技术研究中心
【基金项目】
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重庆市教委自然科学基金项目(KJ111802);重庆市卫生局医学科研项目(2012-1-096);重庆市高等教育教学改革研究重点项目(132128、133309);重庆万州区科技计划项目(201203055);重庆市应用开发计划项目(cstc2013yykf C10005)
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目的构建大鼠CB1（r CB1）基因真核表达载体,检测r CB1基因在细胞中的表达,研究r CB1对人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的影响。方法从大鼠脑组织中提取总RNA,RT-PCR扩增r CB1基因,通过酶切、纯化、连接PCR纯化产物与p CDNA 3.1（+）质粒,构建pc DNA3.1（+）-r CB1。脂质体法将其转染到HEK293和Ca Ski细胞,Western blot及细胞免疫荧光联合激光扫描共聚焦方法检测r CB1的表达及定位,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot与实时荧光定量PCR检测r CB1、Bcl-2、Bax、Bad表达。结果酶切重组质粒获得5300 bp的载体片段和1500 bp的目的片段,测序结果和r CB1基因序列（NM012784.4）一致。转染HEK293细胞后,r CB1在HEK293细胞细胞膜和细胞质表达。转染Ca Ski细胞后,r CB1使细胞凋亡率增加（P<0.05）;r CB1基因上调Bax、Bad的表达,同时抑制Bcl-2的表达,与空白组比较,其差异具有显著性（P<0.05）。结论成功构建了pc DNA3.1（+）-r CB1真核表达载体,r CB1表达于细胞膜和细胞质,r CB1可以明显促进宫颈癌Ca Ski细胞凋亡,其机制是上调Bax、Bad和抑制Bcl-2表达。
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