【摘 要】
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【目的】建立快速定性、定量检测益生菌产品中植物乳杆菌菌株ST-Ⅲ的方法,为其实际应用提供参考。【方法】根据植物乳杆菌菌株ST-Ⅲ与NCBI库中3株已知序列的植物乳杆菌全基因
【机 构】
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光明乳业股份有限公司研究院/乳业生物技术国家重点实验室;
【基金项目】
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科技部“十二五”科技支撑计划项目(2012BAD28B08);科技部“973”计划项目(2012CB723706);科技部农业成果转化项目(2010GB2C000143)
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【目的】建立快速定性、定量检测益生菌产品中植物乳杆菌菌株ST-Ⅲ的方法,为其实际应用提供参考。【方法】根据植物乳杆菌菌株ST-Ⅲ与NCBI库中3株已知序列的植物乳杆菌全基因组序列差异,设计菌株特异性引物,进行菌株特异性PCR验证和定性检测;然后建立荧光定量PCR,并检测益生菌制品中菌株ST-Ⅲ含量。【结果】设计的引物具有良好的菌株特异性;经PCR扩增,含有ST-Ⅲ的检验样本出现预期特征条带,与预期目的片段(242bp)相近。建立的荧光定量PCR标准曲线方程为y=-3.369lgx+39.84,R2为0.9990,符合Real-time PCR定量的要求,其检测限为2.85×103CFU/mL。经检测,样品中植物乳杆菌ST-Ⅲ的数量分别为3.25×105、1.28×106、4.55×106CFU/mL。【结论】建立的植物乳杆菌菌株ST-Ⅲ定性、定量检测方法快速灵敏、测定时间短,可以在实际生产中应用。
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