【摘 要】
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人工合成玉米赤霉烯酮降解酶基因zhd101,以质粒p ET32a(+)为表达载体,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导转化子,通过SDS-PAGE鉴定ZHD101蛋白表达水平,并纯化ZHD
【机 构】
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沈阳农业大学畜牧兽医学院; 四川理工学院化学与制药工程学院; 沈阳农业大学植物保护学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31201961;31302152);中国博士后科学基金资助(2014M551125);辽宁省教育厅科学研究一般项目(L2014561)
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人工合成玉米赤霉烯酮降解酶基因zhd101,以质粒p ET32a(+)为表达载体,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导转化子,通过SDS-PAGE鉴定ZHD101蛋白表达水平,并纯化ZHD101蛋白。结果表明,重组质粒p ET32a(+)-zhde101经HindⅢ、SacⅠ酶切后,1%琼脂糖凝胶电泳证实zhd101正确插入p ET32a(+)载体。重组菌经IPTG诱导后,表达的ZHD101蛋白分子量为47.5 ku,蛋白表达量约占细菌总蛋白量的35%,纯化后的ZHD101蛋白样品经SDS-PAGE和光密度扫描分析表明其纯度为95%左右。试验结果为进一步研究ZHD101蛋白功能奠定了基础。
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