羊乳低聚糖超高效液相色谱-质谱鉴定中样品前处理方法及液相色谱条件优化

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乳中低聚糖对婴幼儿的生长发育具有重要作用,如促进肠道益生菌的生长、抑制病原菌的侵染及调节免疫系统等。羊乳中含有种类丰富的低聚糖,但含量极少,仅为0.25-0.30 g/L,且大量乳糖的存在对结构解析尚不明确的低聚糖测定造成极大干扰。针对这一问题,本文通过Sep-PakC18与石墨化碳柱法、超滤法、透析法和葡萄糖凝胶层析法四种不同的前处理方法,以离子交换色谱法(HPAEC-PAD)检测乳糖的去除率和低聚糖的损失率为评价指标,最终确定葡聚糖凝胶层析法为最优前处理方法。然后,采用超高效液相Q-Exactive Focus质谱对羊乳中的低聚糖进行分析及结构鉴定,以低聚糖的总离子流图为评价指标,对液相洗脱条件进行优化,最终优化的条件为0-20 min,95%-78%A;20-35 min,78%-73%A;35-38 min,73%-62%A;38-45 min,62%-50%A。结果显示,采用凝胶层析法前处理样品测得低聚糖种类显著高于未去除乳糖的样品,在最优液相分离条件下,羊乳低聚糖中同分异构体得到较好的分离,对羊乳中低聚糖的结构解析具有重要参考价值。
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