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目的Ⅱ型胶原蛋白是软骨细胞表达的特征性蛋白,随着软骨细胞的不断传代培养,Ⅱ型胶原蛋白表达逐渐减少。通过观察Ⅱ型胶原蛋白对去分化兔关节软骨细胞再分化的作用,为软骨细胞更好地应用于软骨组织工程奠定实验基础。方法无菌条件下取7月龄新西兰大耳白兔双侧膝关节分离培养软骨细胞,体外单层传代培养至第7代,分别为P1、P2、P3、P4、P5、P6、P7。采用RT-PCR、实时定量PCR、1,9二甲基亚甲蓝(1,9-dimethylmethyleneblue,DMMB)法检测其表型维持情况。根据观察结果,选择去分化的软骨细胞(P7),并给予不同浓度(0、0.5%、1.0%、1.5%)Ⅱ型胶原蛋白刺激。采用RT-PCR及实时定量PCR检测各浓度组去分化软骨细胞再分化的程度,DMMB法检测糖胺聚糖分泌情况。结果 P1～P7细胞糖胺聚糖含量分别为(12.20±0.17)、(11.20±0.24)、(11.18±0.16)、(10.89±0.50)、(8.73±0.19)、(9.39±0.32)、(8.18±0.20)μg,P2、P3、P4间细胞糖胺聚糖含量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);其余各代次细胞糖胺聚糖含量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。P4、P5、P6、P7Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖mRNA均有表达,其中P4～P7间Ⅰ型胶原mRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05);Ⅱ型胶原及蛋白聚糖比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。0、0.5%、1.0%、1.5%浓度组的P7软骨细胞糖胺聚糖含量分别为(8.20±0.16)、(14.61±0.33)、(13.93±0.25)、(19.59±0.46)μg,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。随着Ⅱ型胶原蛋白浓度的升高,各浓度组细胞Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA表达逐渐增强,Ⅰ型胶原表达减弱;不同浓度组中Ⅰ、Ⅱ型胶原及蛋白聚糖mRNA表达比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Ⅱ型胶原蛋白可促进兔去分化软骨细胞再分化与活化。