【摘 要】
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本研究旨在构建1个适用于农杆菌介导真菌遗传转化(ATMT)的RNA干扰载体pCamhybgfp4,为系统研究植物病原真菌基因功能提供便利.通过基因工程及分子生物学技术,将pSilent-1载体
【机 构】
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中国农业科学院果树研究所,兴城,125100;农业部园艺作物种质资源利用重点实验室,兴城,125100
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本研究旨在构建1个适用于农杆菌介导真菌遗传转化(ATMT)的RNA干扰载体pCamhybgfp4,为系统研究植物病原真菌基因功能提供便利.通过基因工程及分子生物学技术,将pSilent-1载体的RNAi发夹结构与潮霉素抗性基因(HygR)整合到能被根癌农杆菌识别的T-DNA序列中.以eGFP为靶基因,构建eGFP RNAi载体,并将eGFP RNAi载体转入根癌农杆菌LBA4404,通过ATMT方法,获得eGFP RNAi菌株.绿色荧光检测和定量PCR分析结果显示,eGFP RNAi菌株eGFP无表达或表达量明显降低,表明RNA干扰载体pCamhybgfp4适用于ATMT介导的苹果炭疽叶枯病菌遗传转化.RNAi载体的成功构建为进一步通过RNA干扰技术研究苹果炭疽叶枯病菌致病机制研究奠定了基础.
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